In welchen Bereichen werden PCR-Tests eingesetzt

Die Molekularbiologie gilt in der aktuellen medizinischen Forschung als Spitzentechnologie und die 44PCR-Erkennungstechnologie ist eine davon, die in der klinischen Medizin weit verbreitet ist. 44Die PCR-Erkennungstechnologie wird hauptsächlich zur Analyse von Gensequenzen und zum Erkennen des Auftretens von Tumoren, Krebszellen und genetischen Erkrankungen verwendet. Seine Eigenschaften bestehen darin, dass es mutierte Gene in kurzer Zeit erkennen kann, auch komplexe genetische Organisationen verfolgen kann und sich leicht mit anderen genetischen Testmethoden kombinieren lässt, sodass es in der medizinischen Forschung weit verbreitet ist.

Anwendung der PCR zur Mutationserkennung von Genen:

1. Direkter PCR-Nachweis von Punktmutationen

1. Direkter Nachweis von Deletionen mittels PCR:

Wenn es innerhalb eines Gens eine Deletion gibt, kann unter Verwendung der bekannten DNA-Sequenz des Gens ein Primerpaar auf beiden Seiten des gelöschten Fragments entworfen werden. Anschließend wird eine PCR durchgeführt und das Produkt einer Agarosegelelektrophorese unterzogen und mit Ethidiumbromid gefärbt. Das Vorhandensein spezifischer Amplifikationsprodukte wird unter einem Ultraviolettdetektor nachgewiesen. So lässt sich sehr einfach feststellen, ob in der zu testenden Probe ein DNA-Fragment fehlt.

1. Deletionserkennung mithilfe eines Primerpaars PCR. Wenn die DNA-Sequenz eines Gens eindeutig ist und die Deletionsstelle relativ festgelegt ist, kann auf beiden Seiten des Deletionsfragments ein geeignetes Primerpaar entsprechend der DNA-Sequenz der Deletionsregion für die PCR synthetisiert werden. Anschließend werden eine Agarosegelelektrophorese und eine Ethidiumbromidfärbung durchgeführt und das Vorhandensein spezifischer amplifizierter Fragmente unter kurzwelligem ultraviolettem Licht beobachtet. Diese Methode ist der schnellste Weg, Deletionen von Genfragmenten zu erkennen.

2. Multiplex-PCR-Erkennung mit mehreren Primerpaaren fehlt.

3. Nachweis des Heterozygotieverlustes mittels PCR-Technologie.

2. Direkter Nachweis einer einzelnen Alkali-Verdrängungs-PCR

1. Direkter Nachweis von Veränderungen an Restriktionsendonukleasen-Spaltstellen – enzymatische Analyse des PCR-Produkts.

2. 3'-spezifische PCR, Amplifikationsblockierendes Mutationssystem und allelspezifische PCR.

3. 3.PCR-Direktsequenzierung.

4. PCR-Oligonukleotid-Sonden-Punkthybridisierung (PCR-ASb).

2. Schnelles Screening mutierter Gene mittels PCR-Technologie

Die oben genannten Methoden können die Mutationsstelle direkt erkennen. Voraussetzung ist, dass Art und Ort der Mutation klar sind. In vielen Fällen ist die Stelle der Genmutation jedoch nicht festgelegt und die Art nicht sehr klar. Daher sind einige schnelle und einfache Screeningmethoden erforderlich, um festzustellen, ob in der Probe eine Genmutation vorliegt. In den letzten Jahren wurde die auf PCR-Technologie basierende schnelle Mutationsscreening-Technologie häufig zum Nachweis von Genmutationen in Tumoren und genetischen Erkrankungen eingesetzt.

1. PCR-Einzelstrang-Konformationspolymorphismus

(ii) Nachweis von Genmutationen mittels denaturierender Gradientengelelektrophorese (DGGE), Gelelektrophorese bei konstanter Temperatur (CGGE) und Temperatur (TGGE).

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass es viele auf der PCR-Technologie basierende Technologien zur Erkennung von Genmutationen gibt und jede ihre eigenen Vor- und Nachteile hat. Die am häufigsten verwendeten sind jedoch PCR-SSCP, PCR-ASO und die direkte Sequenzierung im PCR-Zyklus. Mit dem kontinuierlichen Aufkommen neuer Methoden wird die Erforschung von Genmutationen erheblich gefördert.