Welche Tipps gibt es zur Verwendung von Nitrozellulose?

Cellulosenitrat ist ein weißes Polymer. Diese Substanz hat tatsächlich viele Namen, wie z. B. Cellulosenitrat, und ihre englische Abkürzung ist NC. Diese chemische Substanz hat viele Eigenschaften, z. B. ändert sie leicht ihre Farbe, wenn sie dem Sonnenlicht ausgesetzt wird, und sie ist auch leicht zu brennen. Daher ist Cellulosenitrat tatsächlich eine gefährliche Substanz. Sie müssen bei der Verwendung vorsichtig sein. Im Folgenden erfahren Sie, wie Sie Cellulosenitrat richtig verwenden.

Anwendungstipps für Nitrocellulosemembranen:

1. Prinzip der Protein-Membran-Bindung

Das Bindungsprinzip zwischen Protein und Membran. Bekannte Bindungskräfte sind hydrophobe Kräfte, H-Bindungskräfte, elektrostatische Kräfte usw. Das genaue Bindungsprinzip ist nicht klar und wird hauptsächlich durch Hypothesen gestützt. Es gibt zwei Haupthypothesen:

1) Zunächst werden die beiden durch elektrostatischen Widerstand verbunden. Anschließend verlassen sie sich auf H-Bindungen und hydrophobe Effekte, um die Verbindung langfristig aufrechtzuerhalten.

2) Zunächst werden die beiden durch hydrophobe Wechselwirkung kombiniert, und dann wird der elektrostatische Effekt genutzt, um die Kombination langfristig aufrechtzuerhalten.

Beide Hypothesen deuten darauf hin, dass der Bindungsprozess aus zwei Schritten besteht: Erstbindung und dann Langzeitbindung. Aufgrund der Mehrdeutigkeit des Bindungsprinzips stützt sich die Arbeit auf diesem Gebiet stark auf praktische Erfahrungen.

2. Einfluss der Membran auf die Bindung

1) Membranporengröße

Manche Techniker verwenden zur Unterscheidung verschiedener Membranen gerne die Membranporengröße. Beachten Sie jedoch, dass dies nur auf Produkte desselben Herstellers zutrifft. Handelt es sich um Produkte unterschiedlicher Hersteller, ist dieser Vergleich bedeutungslos. Die Beziehung zwischen Membranporengröße und Chromatographiegeschwindigkeit wurde oben beschrieben.

Mit abnehmender Membranporengröße vergrößert sich die tatsächlich verfügbare Oberfläche der Membran und damit auch die Menge an membrangebundenem Protein. Der Parameter zur Abschätzung der Oberfläche ist das Oberflächenverhältnis (das Verhältnis der tatsächlich verfügbaren Oberfläche zur genutzten Membranoberfläche).

Darüber hinaus gilt: Je kleiner die Membranporengröße, desto langsamer die Chromatographiegeschwindigkeit, desto länger dauert es, bis der goldmarkierte Komplex die T-Linie passiert, und desto vollständiger ist die Reaktion.

Kombiniert man die beiden oben genannten Punkte, kommt man zu dem Schluss, dass die Empfindlichkeit umso höher ist, je kleiner die Membranporengröße ist. Gleichzeitig verlangsamt es aber auch die Plattenlaufgeschwindigkeit und erhöht die Wahrscheinlichkeit einer unspezifischen Bindung, d. h., desto höher ist das falsch positive Ergebnis. Daher ist es notwendig, entsprechend den Testergebnissen die für das jeweilige Projekt geeignete Membran auszuwählen und das richtige Gleichgewicht zu finden.

2) Unterschiede bei Membranen verschiedener Hersteller

Dieser Unterschied ergibt sich im Wesentlichen aus zwei Punkten:

1> Bei der Herstellung von Membranen sind die Quellen, Arten und Mengen der verwendeten Polymere und Tenside unterschiedlich. Ebenso haben diese beiden Stoffarten im Allgemeinen einen größeren Einfluss auf die Leistung bei der Membranverarbeitung.

2>Der Verarbeitungsprozess ist unterschiedlich.

3. Biologische Rohstoffe, Reagenzien und Formulierungen von Pufferlösungen

1) Biologische Rohstoffe. Die Verwendung biologischer Rohstoffe für CT-Linien ist unterschiedlich, daher wird hier nur eine kurze Beschreibung gegeben.

Erstens binden monoklonale Antikörper besser an Membranen als polyklonale Antikörper. Der Hauptgrund hierfür liegt darin, dass polyklonale Antikörper viele unterschiedliche Oberflächenstellen aufweisen und die optimalen Bindungsbedingungen für jede Stelle an der Membran leicht unterschiedlich sind, was die Optimierung zweifellos erschwert.

Zweitens gilt: Je höher das Molekulargewicht, desto schwieriger ist die Bindung des Proteins an das Festphasenmaterial.

2) Puffer

Was alle am meisten beschäftigt, ist wahrscheinlich der Wunsch, eine Formel mit hervorragender Leistung zu erhalten, einschließlich Puffer, Blockierungslösung und anderen Formeln für Verarbeitungslösungen.

Tatsächlich ist es unmöglich, eine universelle Formelliste bereitzustellen. Denn unterschiedliche Reaktionssysteme erfordern unterschiedliche Formeln zur Unterstützung und die Reaktionssysteme verschiedener Institutionen sind unterschiedlich. Wenn Sie „Fische“ fangen möchten, müssen Sie zuerst „Angeln“ lernen. Um nicht alle in die Irre zu führen, bieten die folgenden Fragen zu Formeln nur Ideen. Bitte erkunden Sie die spezifische Formel selbst.

Die Zusammensetzung des Puffers ist im Allgemeinen: PBS (oder ein anderes Puffersystem) + Wirkstoff (für ein bestimmtes Problem) + PH-Anpassung. Nach dem Lesen verschiedener früherer Materialien bin ich persönlich der Meinung, dass das Formelprinzip eher einfach als kompliziert sein sollte und der Wirkstoff je nach Bedarf hinzugefügt werden sollte. Viele der ursprünglich hinzugefügten Wirkstoffe werden aufgrund der Verbesserung der Membranherstellungstechnologie nicht mehr benötigt.

Das empfohlene Puffersystem ist 0,01 M PBS pH 7–7,2, das eine gute Anpassungsfähigkeit an eine Vielzahl von Antigenen und Antikörpern aufweist.

Die wichtigsten Faktoren, die die Leistung des Stoffes beeinflussen, sind:

Eine kleine Menge NACL kann die Signalstärke verringern und Fehlalarme vermeiden.

Organischer Alkohol (Methanol, Isopropanol usw.) benetzt die Membran, reduziert die statische Elektrizität auf der Membran und erleichtert die Bindung der Beschichtung. Ich persönlich empfehle es nicht, da der Membranherstellungsprozess verbessert wurde.

Tenside (TW20, TX100) können die Hydrophilie erhöhen, Hohllinien vermeiden und die Farbe verbessern.

Zucker, ein Schutzmittel, verlangsamt den Alterungsprozess und kann wie oben beschrieben auch die Hydrophilie erhöhen.

Durch Einstellen des pH-Werts auf einen bestimmten Wert können falsche Positivergebnisse vermieden werden.

4. Beispielumgebung

Die Umgebungsfeuchtigkeit ist für den Filmabscheidungsprozess sehr wichtig. Die optimale Luftfeuchtigkeit liegt im Allgemeinen zwischen 45 und 65 %.

Bei zu geringer Luftfeuchtigkeit sammelt sich leicht statische Ladung auf der Membran und es bilden sich leicht Streupunkte auf der Membran, die im Test zu hydrophoben Flecken führen.

Wenn die Luftfeuchtigkeit zu hoch ist, verstärkt sich die Kapillarwirkung auf der Membran und der Film neigt dazu, die CT-Linie breiter oder sogar diffuser zu machen.

Um eine gleichmäßige Membranfeuchtigkeit während des Probenauftragens zu gewährleisten, wird die Membran vor dem Probenauftragen üblicherweise eine Zeit lang feuchten Bedingungen ausgesetzt.

5. Zusammenhang zwischen Spotting-Instrument und Membranoberflächenzustand

Derzeit gibt es zwei Arten des Spottings, den Kratzfilmtyp und den berührungslosen Spottingfilmtyp. Der berührungslose Spottingfilmtyp ist besser als der Kratzfilmtyp, und der importierte Kratzfilmtyp ist besser als der inländische Kratzfilmtyp.

Da bei der Membrankratzmethode ein weiches Röhrchen verwendet wird, um den Antikörper auf die Membranoberfläche zu ziehen, und die Membran selbst weich und spröde ist, hinterlässt das Kratzröhrchen Spuren auf ihrer Oberfläche. Importierte Membrankratzmaschinen verwenden bessere Materialien und Kontrollsysteme, sodass die hinterlassenen Kratzer leichter sind, während inländische Instrumente minderwertiger sind und daher schwerwiegendere Kratzer hinterlassen. Kratzer können leicht eine Resistenz gegen den goldmarkierten Komplex der Chromatographie bilden, was zu falschen Positivergebnissen führt. Gleichzeitig kann es leicht zu einem seltsamen Phänomen kommen, dass beim Ausführen der Platte eine dünne Linie (Geisterlinie) an der T-Linienposition erscheint und die Geisterlinie verschwindet, nachdem die Platte fertig ist.

6. Membranbreite und Spotting-Position

Die Breite der Membran beträgt im Allgemeinen 18 mm (oder 20 mm) und 25 mm und wird für Teststreifen bzw. Testplatten verwendet.

Unterschiedliche T-Linien-Spotting-Positionen führen jedoch zu unterschiedlichen Empfindlichkeiten. Wenn sich die Spotting-Position nach oben bewegt, verlangsamt sich die Geschwindigkeit des goldmarkierten Komplexes, der durch die T-Linien-Position läuft, die Reaktionszeit erhöht sich und die Empfindlichkeit nimmt zu. Umgekehrt nimmt die Empfindlichkeit ab. Mit dieser Methode kann die Empfindlichkeit geändert und Fehlalarme eliminiert werden.